العديد من الإنزيمات شائعة الاستخدام في تجارب PCR

تفاعل البلمرة المتسلسل، ويختصر بـتفاعل البوليميراز المتسلسلباللغة الإنجليزية، هي تقنية بيولوجيا جزيئية تستخدم لتضخيم أجزاء معينة من الحمض النووي.يمكن اعتباره بمثابة تكرار خاص للحمض النووي خارج الجسم، والذي يمكن أن يزيد بشكل كبير كمية صغيرة جدًا من الحمض النووي.خلال كاملتفاعل البوليميراز المتسلسلفي عملية التفاعل، تلعب فئة واحدة من المواد دورًا حيويًا - الإنزيمات.

1. طق الحمض النووي

في التجارب في الأيام الأولى منتفاعل البوليميراز المتسلسلاستخدم العلماء بوليميريز DNA Escherichia coli I، ولكن هناك مشكلة في هذا الإنزيم: فهو يحتاج إلى تجديد إنزيم جديد في كل مرة يتم فيها تنفيذ دورة، مما يجعل خطوات العملية معقدة بعض الشيء ويصعب تضخيمها تلقائيًا بالكامل.تم حل هذه المشكلة بعد أن قام العلماء عن طريق الخطأ بعزل بوليميراز الحمض النووي طق من Thermus aquaticus في عام 1988. ومنذ ذلك الحين، أصبح التضخيم التلقائي للحمض النووي حقيقة واقعة.كما أن اكتشاف هذا الإنزيم يجعلتفاعل البوليميراز المتسلسلالتكنولوجيا تكنولوجيا مريحة وعملية وعالمية.حاليًا، يعد بوليميريز الحمض النووي طق هو البوليميراز الأكثر شيوعًا في مجموعات الحمض النووي.

2. بفوDNA

كما ذكرنا أعلاه، فإن Taq DNase به خطأ كبير، لذلك قام العلماء بتعديل بوليميريز DNA Taq إلى حد معين لتجنب التضخيم غير المحدد بسبب عدم التطابق، مما يؤدي إلى نتائج اختبار غير دقيقة.لكن تعديل بوليميراز الحمض النووي طق يمكن أن يمنع نشاط بوليميراز الحمض النووي في درجة حرارة الغرفة.يمكن لبوليميراز PfuDNA أن يعوض العيوب المذكورة أعلاه لبوليميريز DNA Taq، بحيث يمكن تنفيذ تفاعل PCR بشكل طبيعي، ويمكن تحسين معدل نجاح تضخيم الجينات المستهدفة بشكل فعال.

3. النسخ العكسي

تم اكتشاف إنزيم النسخ العكسي في عام 1970. يستخدم هذا الإنزيم الحمض النووي الريبوزي (RNA) كقالب، ويستخدم dNTP كركيزة، ويتبع مبدأ الاقتران الأساسي، ويقوم بتجميع شريط DNA واحد مكمل لقالب الحمض النووي الريبي (RNA) في الاتجاه 5′-3′.يعتمد إنزيم النسخ العكسي في المقام الأول على نشاط بوليميريز الحمض النووي من قوالب DNA أو RNA، وبالتالي ليس له نشاط نوكلياز خارجي 3′-5′.ومع ذلك، فهو يحتوي على نشاط RNase H، مما يحد من طول تخليق إنزيم النسخ العكسي إلى حد ما.نظرًا لانخفاض الدقة والثبات الحراري للنسخ العكسي البري، قام العلماء أيضًا بتعديله.

لتفاعل البوليميراز المتسلسلفي التجارب، المواد الاستهلاكية الرئيسية هي: أنبوب PCR فردي، أنبوب PCR ذو 4/8 شريط، ألواح PCR.

لابيومستهلكات PCRلديك ما يليمزايا:

لوحات PCR: توافق واسع النطاق مع التدوير الحراري؛التباين العالي، سهولة تحديد البئر؛انعكاس مضان جيد؛ جيدانتقال الحرارة؛مثبطات DNase وRNase وDNA وPCR معتمدة وخالية من البيروجين.

أنابيب PCR الفردية: مقاومة للتبخر، جيدةانتقال الحرارة؛وضوح بصري ممتاز؛ مثبطات DNase وRNase وDNA وPCR المعتمدة، وخالية من البيروجين.

أنابيب PCR ذات 4/8 شرائط: جدران رقيقة جداً؛ وضوح عالي؛ انعكاس مضان جيد؛يمكن استخدامها في صناعة الأدوية، وصناعة الأغذية، والبيولوجيا الجزيئية؛ مادة PP البكر عالية الجودة؛ مثبطات DNase وRNase وDNA وPCR المعتمدة، وخالية من البيروجين.